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液相色譜儀主要由輸液系統、進樣系統、分離系統（色譜柱）、檢測系統和數據處理系統五部分組成，工作流程如下： - 輸液系統（高壓泵）
- 功能：將流動相（液體溶劑）以恒定流速和壓力輸送至色譜柱，確保分離過程的重復性和穩定性。
- 關鍵參數：
- 流速：通常為0.1-10 mL/min，影響分離效率和保留時間。
- 壓力：高效液相色譜（HPLC）壓力可達40-60 MPa（400-600 bar），以克服固定相的高阻力。
- 類型：
- 單泵：適用于等度洗脫（流動相組成恒定）。
- 雙泵/四元泵：通過比例閥混合不同溶劑，實現梯度洗脫（流動相組成隨時間變化）。
- 進樣系統
- 功能：將樣品定量注入流動相，形成均勻的樣品帶進入色譜柱。
- 類型：
- 手動進樣閥：通過旋轉閥芯切換樣品環位置，適用于低通量分析。
- 自動進樣器：可編程控制進樣體積（通常0.1-100 μL）和順序，提高分析效率。
- 要求：進樣體積需精確，避免樣品擴散導致峰展寬。
- 分離系統（色譜柱）
- 核心組件：由不銹鋼或聚醚醚酮（PEEK）管材制成，內填充固定相（顆粒直徑通常1.7-10 μm）。
- 固定相類型：
- 反相色譜（RP-HPLC）：固定相為非極性（如C18、C8），流動相為極性（水/有機溶劑混合），適用于分離極性差異大的化合物（如藥物、代謝物）。
- 正相色譜（NP-HPLC）：固定相為極性（如硅膠、氨基），流動相為非極性（正己烷/異丙醇），適用于分離極性化合物（如脂類、甾體）。
- 離子交換色譜（IEC）：固定相帶電荷（如磺酸基、季銨基），通過靜電作用分離離子型化合物（如氨基酸、蛋白質）。
- 尺寸排阻色譜（SEC）：固定相為多孔凝膠，按分子大小分離（如蛋白質、聚合物）。
- 分離原理：
- 分配系數（K）：組分在固定相和流動相中的濃度比，K越大保留時間越長。
- 保留時間（tR）：組分從進樣到檢測器響應最大值的時間，受流動相組成、流速、柱溫影響。
- 檢測系統
- 功能：將分離后的組分轉化為可測量的信號（如電信號、光信號），實現定量和定性分析。
- 常用檢測器類型：
- 紫外-可見檢測器（UV-Vis）：
- 原理：檢測組分對特定波長光的吸收（如254 nm用于芳香族化合物）。
- 特點：靈敏度高（ng級）、選擇性較好，但需組分有紫外吸收。
- 熒光檢測器（FLD）：
- 原理：檢測組分受激發后發射的熒光（如多環芳烴、某些藥物）。
- 特點：靈敏度極高（pg級），但僅適用于能產生熒光的組分。
- 質譜檢測器（MS）：
- 原理：將組分離子化后按質荷比（m/z）分離，提供分子量和結構信息。
- 特點：通用性強、靈敏度高，可與液相色譜聯用（LC-MS）實現復雜樣品分析。
- 蒸發光散射檢測器（ELSD）：
- 原理：將流動相蒸發后檢測顆粒散射光，適用于無紫外吸收的組分（如糖類、脂類）。
- 特點：對流動相揮發性要求高，靈敏度低于UV-Vis。
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發表于 2025-8-8 15:34:08
