正相色譜柱和反相色譜柱的區(qū)別

花開正好

正相色譜柱和反相色譜柱在固定相、洗脫順序以及適用樣品等方面存在區(qū)別。以下是具體分析：
1.固定相
正相色譜柱：通常使用硅膠(Silica)以及其他具有極性官能團如氨基(NH2)、氰基(CN)的鍵合相填料。
反相色譜柱：常以硅膠為基質(zhì)，表面鍵合有極性相對較弱的官能團，如C18(ODS)、C8(MOS)、C4(Butyl)、C6H5(Phenyl)等。
2.洗脫順序
正相色譜柱：洗脫順序由弱到強，即極性較弱的組分先被沖洗出色譜柱。
反相色譜柱：洗脫順序由強到弱，即極性較強的組分先被沖洗出，而極性弱的組分會在色譜柱上有更強的保留。
3.適用樣品
正相色譜柱：適用于分離水溶性或極性較大的化合物，如生物堿、苷類、糖類、有機酸等。
反相色譜柱：主要應(yīng)用于相對分子質(zhì)量低于5000，特別是1000以下的非極性小分子物質(zhì)的分析和純化，如蛋白質(zhì)、肽、氨基酸、核酸、甾類、脂類、脂肪酸、糖類、植物堿等含有非極性基團的各種物質(zhì)。
4.流動相
正相色譜柱：使用的流動相極性相對比固定相低，如正己烷(Hexane)、二氯甲烷(Methylene Chloride)等。
反相色譜柱：所使用的流動相極性較強，通常為水、緩沖液與甲醇、乙腈等的混合物。
正相色譜柱和反相色譜柱的主要區(qū)別在于固定相的極性不同，這導(dǎo)致了它們在洗脫順序、適用樣品和流動相選擇上的差異。正相色譜柱適用于分離極性較大的化合物，而反相色譜柱則更適合分離非極性和弱極性的小分子物質(zhì)。

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