共聚焦顯微鏡和熒光顯微鏡的區別

森鴻科技

共聚焦顯微鏡和熒光顯微鏡在原理、特點和應用上存在顯著的區別。以下是對這兩者的詳細比較：
一、原理
1.熒光顯微鏡：以紫外線為光源，用以照射被檢物體，使之發出熒光，然后在顯微鏡下觀察物體的形狀及其所在位置。細胞中有些物質，如葉綠素等，受紫外線照射后可發熒光；另有一些物質本身雖不能發熒光，但如果用熒光染料或熒光抗體染色后，經紫外線照射亦可發熒光。
2.共聚焦顯微鏡：也稱為激光共聚焦顯微鏡，它在熒光顯微鏡成像的基礎上加裝激光掃描裝置，使用紫外光或可見光激發熒光探針。其工作原理是利用激光束作為光源，激光束經照明針孔，經由分光鏡反射至物鏡，并聚焦于樣品上，對標本焦平面上每一點進行掃描。組織樣品中如果有可被激發的熒光物質，受到激發后發出的熒光經原來入射光路直接反向回到分光鏡，通過探測針孔時先聚焦，聚焦后的光被光電倍增管（PMT）探測收集，并將信號輸送到計算機，處理后在計算機顯示器上顯示圖像。
二、特點
1.熒光顯微鏡：主要用于研究細胞內物質的吸收、運輸、化學物質的分布及定位等。熒光顯微鏡可以對活體細胞進行三維成像和追蹤，是免疫熒光細胞化學的基本工具。
2.共聚焦顯微鏡：能夠利用計算機進行圖像處理，從而得到細胞或組織內部微細結構的熒光圖像，以及在亞細胞水平上觀察諸如Ca2?、pH值、膜電位等生理信號及細胞形態的變化。共聚焦顯微鏡脫離了傳統光學顯微鏡的場光源和局部平面成像模式，具有多重染色、高Z軸分解能、高畫質等特點。
三、應用
1.熒光顯微鏡：
生物大分子的研究：熒光標記可以對分子發生的變化進行實時追蹤和記錄，因此熒光顯微鏡成像技術被廣泛應用于蛋白質、細胞膜、DNA和RNA結構的研究。
細胞生物學：熒光顯微鏡成像技術可以對細胞器、細胞膜、基因表達、細胞周期等細胞內分子級別的生理過程進行實時成像，揭示細胞基本生理過程的發生、發展和終結過程。
神經科學：熒光顯微鏡成像技術可以實時地觀測神經細胞、神經纖維和神經突觸等微觀結構的變化。
醫學診斷：熒光顯微鏡可以對組織切片進行高效成像，以幫助醫學科學家對疾病進行更精細的研究和診斷。此外，還可以將熒光染料標記到待檢測的生物標志物上，如病毒、細胞、蛋白質、腫瘤等，用于多種疾病的檢測和病理診斷。
2.共聚焦顯微鏡：
細胞形態定位、立體結構重組、動態變化過程等研究。
提供定量熒光測定、定量圖像分析等實用研究手段。
結合其他相關生物技術，在形態學、生理學、免疫學、遺傳學等分子細胞生物學領域得到廣泛應用。
綜上所述，共聚焦顯微鏡和熒光顯微鏡在原理、特點和應用上各有優勢，具體選擇哪種顯微鏡取決于研究目的和樣品特性。