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標題: dna測序方法有哪些 [打印本頁]

作者: 博藝科創儀 時間: 2024-10-31 09:37
標題: dna測序方法有哪些

DNA測序方法是指分析特定DNA片段的堿基序列，即腺嘌呤（A）、胸腺嘧啶（T）、胞嘧啶（C）與鳥嘌呤（G）的排列方式的技術。以下是幾種常見的DNA測序方法：

一、傳統測序方法

雙脫氧鏈末端終止法（Sanger測序法）
- 由英國生化學家弗雷德里克·桑格爾發明，是目前應用最廣泛的測序方法之一。
- 原理是利用DNA聚合酶來延伸結合在待定序列模板上的引物，直到摻入一種鏈終止核苷酸為止。每一次序列測定由一套四個單獨的反應構成，每個反應含有所有四種脫氧核苷酸三磷酸（dNTP），并混入限量的一種不同的雙脫氧核苷三磷酸（ddNTP）。由于ddNTP缺乏延伸所需要的3-OH基團，使延長的寡聚核苷酸選擇性地在G、A、T或C處終止。終止點由反應中相應的雙脫氧而定。
- 產生的DNA片段具有共同的起始點，但終止在不同的核苷酸上，可通過高分辨率變性凝膠電泳分離大小不同的片段，然后用X-光膠片放射自顯影或非同位素標記進行檢測，從而獲得DNA序列。
化學降解法
- 由Maxam和Gilbert發明，與Sanger測序法在原理上差異很大，但同樣是根據核苷酸在某一固定的點開始，隨機在某一個特定的堿基處終止，產生A、T、C、G四組不同長度的一系列核苷酸。
- 然后在尿素變性的PAGE膠上電泳進行檢測，從而獲得DNA序列。

二、高通量測序方法

隨著技術的發展，高通量測序方法逐漸興起，這些方法能夠同時測定大量的DNA序列，大大提高了測序效率。

第二代測序技術
- 以循環陣列合成測序法為代表，通過讀取DNA聚合酶或DNA連接酶將堿基連接到DNA鏈上過程中釋放出的光學信號來間接確定序列。
- 這種方法需要昂貴的光學監測系統，并要記錄、存儲并分析大量的光學圖像，增加了儀器的復雜性和成本。
第三代測序技術
- 代表技術為直接測序法，將基因組DNA隨機切割成片段，制成單鏈并與六寡聚核苷酸探針雜交。然后驅動結合了探針的基因組文庫片段通過可尋址的納米孔陣列，通過每個孔的離子電流均可獨立測量，追蹤電流的變化來確定探針雜交在每個基因組片段上的精確位置。最后利用基因組片段上雜交探針的重疊區域將基因組片段文庫排列起來，建立一組完整的基因組探針。
- 這種方法不需要使用化學試劑，有望進一步降低測序成本。

三、特定應用場景的測序方法

全基因組測序（WGS）
- 把物種細胞里面完整的基因組序列從第一個DNA開始一直到最后一個DNA，完完整整地檢測出來并排列好。能夠鑒定出基因組上幾乎任何類型的突變。
全外顯子測序（WES）
- 針對基因組中的外顯子區域進行測序，外顯子是基因中編碼蛋白質的序列部分。這種方法能夠更高效地篩選出與遺傳疾病相關的基因突變。
靶向DNA測序
- 針對特定的基因或基因組區域進行測序。這種方法通常用于研究特定的遺傳疾病或基因功能。
單細胞測序
- 在單細胞層面進行基因組測序，能夠揭示細胞間的異質性。這對于研究發育生物學、腫瘤學等領域具有重要意義。
甲基化測序
- 針對DNA甲基化修飾進行測序，甲基化是一種重要的表觀遺傳修飾方式。甲基化測序能夠揭示基因表達調控的機制，對于研究疾病的發生和發展具有重要意義。常見的甲基化測序技術包括全基因組DNA甲基化測序（WGBS）、簡化基因組甲基化測序（RRBS）等。

作者: 夜星晨 時間: 2024-11-1 17:03
我很欣賞你的研究方式，幫助我了解得更透徹。

作者: 黑色星期五 時間: 2024-11-21 18:12
解答很到位，很能幫我解決問題。

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