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標題: 氨基色譜柱活化方法 [打印本頁]

作者: 123c 時間: 2025-9-1 17:25
標題: 氨基色譜柱活化方法

氨基色譜柱（NH?柱）是一種常用的正相色譜柱，其固定相為氨基鍵合硅膠，適用于分離糖類、脂肪酸、醇類等極性化合物。新柱或長期未使用的色譜柱在使用前需進行活化處理，以去除殘留雜質(zhì)、恢復(fù)柱效并延長使用壽命。以下是氨基色譜柱的活化方法及注意事項：

一、活化目的

去除殘留溶劑：消除生產(chǎn)或儲存過程中殘留的有機溶劑（如甲醇、乙腈）。
平衡固定相：使固定相表面充分潤濕，形成穩(wěn)定的分離層。
提高柱效：恢復(fù)色譜柱的分離性能，確保峰形對稱、保留時間穩(wěn)定。

二、活化步驟1. 流動相準備

正相體系（常用）：
- 初始流動相：正己烷-異丙醇（90:10，v/v）或純正己烷（根據(jù)柱子說明書調(diào)整）。
- 梯度活化：若柱子說明書推薦梯度活化，可按以下比例逐步過渡：
  - 階段1：正己烷-異丙醇（95:5，v/v）
  - 階段2：正己烷-異丙醇（90:10，v/v）
  - 階段3：正己烷-異丙醇（85:15，v/v）
  - 每個階段運行10-20倍柱體積（CV），流速0.5-1.0 mL/min。
反相體系（少數(shù)情況）：
- 若柱子設(shè)計為反相模式（如C18改性氨基柱），需用甲醇-水（80:20，v/v）或純甲醇活化。

2. 連接色譜柱

將色譜柱按流動相流向（通常箭頭標識）正確安裝到液相色譜系統(tǒng)中。
確保系統(tǒng)管路、過濾器、進樣閥等部件清潔，避免二次污染。

3. 沖洗色譜柱

低流速啟動：以0.1-0.2 mL/min的流速緩慢注入流動相，避免壓力突變損壞柱床。
逐步提高流速：待壓力穩(wěn)定后，將流速升至0.5-1.0 mL/min（根據(jù)柱子規(guī)格調(diào)整）。
持續(xù)沖洗：
- 正相體系：沖洗20-50倍柱體積（CV），直至基線平穩(wěn)。
- 反相體系：沖洗10-20倍柱體積（CV）。

4. 平衡色譜柱

活化完成后，用分析用流動相（如正己烷-異丙醇-乙酸，90:9:1，v/v/v）平衡色譜柱10-20倍柱體積，確保分離條件穩(wěn)定。

三、注意事項

避免壓力沖擊：
- 活化時流速需從低到高逐步調(diào)整，防止柱床塌陷或固定相脫落。
- 關(guān)閉泵或更換流動相時，應(yīng)先降流速至零，再操作。
防止柱子干燥：
- 活化過程中及完成后，色譜柱需始終保持潤濕狀態(tài)。若需暫停使用，應(yīng)用活化溶劑充滿柱子并密封兩端。
兼容性檢查：
- 確保活化溶劑與分析方法兼容。例如，若后續(xù)分析使用含水的流動相，活化后需用無水溶劑過渡，避免固定相水解。
溫度控制：
- 正相色譜柱通常在室溫下活化，避免高溫（>40℃）導(dǎo)致固定相變性。
特殊柱子處理：
- 若柱子說明書推薦特定活化程序（如使用極性溶劑預(yù)處理），需嚴格遵循。例如，某些氨基柱需先用二氯甲烷沖洗以去除殘留硅醇基。

作者: 睿析儀器 時間: 2025-9-2 10:44
感謝樓主的分享，我會試試的！

作者: 素質(zhì)不詳 時間: 2025-11-1 23:38
雖然我對這個話題不是非常了解，但看到大家的討論，我也收獲了很多新知識，感謝分享！

作者: 含辛茹苦 時間: 2025-11-23 20:13
你對問題的分析非常透徹，受益匪淺。

歡迎光臨制造論壇-制造行業(yè)自己的交流社區(qū)! (http://m.2021ok666.com/)

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