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標(biāo)題: 雙光子顯微鏡和共聚焦顯微鏡的區(qū)別 [打印本頁(yè)]

作者: 欣榮設(shè)備 時(shí)間: 2025-8-1 16:41
標(biāo)題: 雙光子顯微鏡和共聚焦顯微鏡的區(qū)別
雙光子顯微鏡和共聚焦顯微鏡都是生物學(xué)和醫(yī)學(xué)研究中常用的成像工具，但它們?cè)谠怼⑿阅芎蛻?yīng)用上存在明顯區(qū)別。
　　成像原理
　　共聚焦顯微鏡采用點(diǎn)光源照明，通過(guò)針孔裝置排除焦平面以外的雜散光，僅讓聚焦平面上的信號(hào)通過(guò)，從而獲得清晰的圖像。而雙光子顯微鏡基于雙光子吸收原理，使用長(zhǎng)波長(zhǎng)的脈沖激光激發(fā)樣品，只有在焦點(diǎn)處才能同時(shí)吸收兩個(gè)光子發(fā)生熒光發(fā)射，實(shí)現(xiàn)對(duì)樣品的三維成像。
　　成像深度
　　共聚焦顯微鏡由于使用的是單光子激發(fā)，激光在生物組織中傳播時(shí)會(huì)被散射和吸收，導(dǎo)致成像深度有限，一般在100-200微米左右。雙光子顯微鏡使用長(zhǎng)波長(zhǎng)激光，其散射程度相對(duì)較小，且只有焦點(diǎn)處產(chǎn)生熒光，減少了非焦平面的光損傷和背景干擾，因此成像深度更深，可達(dá)500-1000微米，更適合對(duì)厚組織樣本進(jìn)行觀察。
　　光損傷
　　共聚焦顯微鏡在成像過(guò)程中，整個(gè)照明路徑上的樣品都會(huì)受到激光照射，容易對(duì)樣品造成光損傷和光漂白，影響樣品的活性和觀察的連續(xù)性。雙光子顯微鏡只有焦點(diǎn)處的樣品被激發(fā)，對(duì)周圍組織的光損傷和光漂白較小，更適合長(zhǎng)時(shí)間觀察活細(xì)胞和組織的動(dòng)態(tài)變化。
　　應(yīng)用場(chǎng)景
　　共聚焦顯微鏡操作相對(duì)簡(jiǎn)單，成像速度較快，適用于對(duì)細(xì)胞和組織的常規(guī)觀察，如細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度的動(dòng)態(tài)變化、蛋白質(zhì)的定位等。雙光子顯微鏡則更側(cè)重于對(duì)深層組織和活體動(dòng)物的研究，例如在神經(jīng)科學(xué)中觀察大腦神經(jīng)元的活動(dòng)、在腫瘤研究中觀察腫瘤組織的生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移等。
　　雙光子顯微鏡和共聚焦顯微鏡各有優(yōu)勢(shì)，研究人員可根據(jù)具體的研究需求選擇合適的顯微鏡。

作者: 801hk 時(shí)間: 2025-10-31 06:16
謝謝您的分享，這對(duì)我來(lái)說(shuō)非常有幫助。

作者: 大餡餅 時(shí)間: 2025-11-10 22:39
贊同，你的建議非常中肯。

作者: 精準(zhǔn)儀器坊 時(shí)間: 7 天前
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