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標題:
分光光度計的使用
[打印本頁]
作者:
德赫機械
時間:
2025-5-28 08:58
標題:
分光光度計的使用
分光光度計是實驗室中用于定量分析物質濃度的核心儀器,通過測量物質對特定波長光的吸收程度(吸光度),結合朗伯-比爾定律(A=ε?c?l),可間接計算目標物質的濃度。以下是其使用流程、關鍵步驟及注意事項的詳細說明:
一、使用前準備
儀器檢查
開機預熱
:開啟電源后,儀器需預熱15-30分鐘(紫外可見分光光度計需預熱更久),確保光源穩定。
光源檢查
:確認鎢燈(可見光區)或氘燈(紫外光區)正常點亮,無閃爍或異常噪音。
波長校準
:使用鈥玻璃、汞燈等標準物質驗證波長準確性(如546.07 nm、486.13 nm等特征峰)。
試劑與樣品準備
空白對照
:使用與樣品相同的溶劑(如去離子水、緩沖液)作為參比溶液,消除溶劑背景吸收。
樣品處理
:確保樣品澄清透明,避免懸浮顆粒干擾(如需離心或過濾)。
濃度范圍
:根據預估濃度稀釋樣品,使吸光度落在0.2-0.8(線性范圍)之間。
二、操作步驟
波長設置
根據目標物質的吸收峰選擇波長(如核酸在260 nm,蛋白質在280 nm)。
示例:測定DNA濃度時,設置波長為260 nm。
調零(基線校正)
將空白對照溶液倒入比色皿(光程通常為1 cm),放入樣品室。
調節“調零”或“Abs 0”旋鈕,使儀器顯示吸光度為0.000。
樣品測量
倒出空白溶液,用待測樣品潤洗比色皿2-3次,再注入樣品。
擦拭比色皿外壁水漬,放入樣品室,關閉艙門。
讀取吸光度值(A)或透光率(T,
T=10?A
)。
數據處理
單波長法
:直接使用吸光度值計算濃度(
c=A/(ε?l)
)。
雙波長法
:選擇兩個波長(如260 nm和280 nm),通過差值消除雜質干擾。
標準曲線法
:測定一系列已知濃度標準品的吸光度,繪制線性回歸方程,再計算未知樣品濃度。
作者:
不知道叫啥
時間:
2025-11-26 13:45
好文推薦,大家都來看看吧。
作者:
貝碧加
時間:
2025-11-28 23:32
這個問題確實值得從不同角度去思考,每個人都有自己的見解。
作者:
悲傷的荷包蛋
時間:
2025-12-1 10:38
感謝大家的討論,讓我收獲良多。
作者:
倒數
時間:
昨天 20:04
謝謝分享,幫大忙了
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